凱氏定氮儀對蛋白質(zhì)含量的測量步驟

　　凱氏定氮儀是對生活中的含有蛋白質(zhì)的東西進(jìn)行測量的。粗蛋白是衡量飼料原料、飼料產(chǎn)品zui重要的指標(biāo)之一。粗蛋白在化驗室的檢測頻率zui高。“粗蛋白”的測定是用凱氏定氮儀測定的，即在崔化劑的作用下，用硫酸在高溫下使樣品中的有機(jī)物分解、脫水，使蛋白質(zhì)和氨化物轉(zhuǎn)變成無機(jī)態(tài)氨和濃硫酸生成硫酸鐵;硫酸鐵在強(qiáng)堿作用下，經(jīng)蒸餾放出氨氣，經(jīng)冷凝的液態(tài)氨被硼酸吸收生成四硼酸按，用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定以確定樣品中的含氮量，所測含氮量乘以6.25，即為樣品中粗蛋白的含量。反應(yīng)過程分為消化、蒸餾、滴定三步。蛋白質(zhì)測定儀即是根據(jù)以上原理設(shè)計而成的。

　　凱氏定氮儀是測定食品中蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法，測定結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確。其中凱氏定氮儀、蛋白質(zhì)測定儀都是利用凱氏定氮法設(shè)計的，但是全自動蛋白質(zhì)測定儀價格昂貴，目前尚難普及。而相應(yīng)的凱氏定氮儀卻得到了相關(guān)人士的認(rèn)可。因為相較于全自動蛋白質(zhì)測定儀，凱氏定氮儀的性價比更高，而且其測定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)法測定無顯著差異。

　　凱氏定氮儀作為蛋白質(zhì)含量測定的*儀器，具有不可撼動的地位。用凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量，其步驟如下：

　　1.樣品消解：準(zhǔn)確稱取0·5~2·0 g混勻固體樣品或吸取5·0~10·0 ml液體樣品于干凈的消化管內(nèi)，加0·5 ~1·0 g硒粉或10 g硫酸鉀+1 g硫酸銅， 10ml硫酸，搖勻，加10 ml過氧化氫，混勻，將消化管放入消化器，放上裝好密封圈的排污管，打開抽氣三通進(jìn)水，使抽氣三通處于吸汽狀態(tài)。接通電源，進(jìn)行消化，如遇難消化的奶粉等樣品，可于消化過程中適當(dāng)增加過氧化氫的加入量，至消化液呈透明藍(lán)綠色液體，關(guān)閉電源，冷卻，定容至100 ml。此過程約需1~2 h。

　　2.測定：打開電源，按儀器說明書調(diào)試凱氏定氮儀進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)(約0·5 min)。把裝有50 ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盤上，接收管插入液面，再將內(nèi)裝適量消化樣品的消化管放到蒸餾器上，加20 ml純水及消化時硫酸5倍量的氫氧化鈉液，打開蒸汽開關(guān)進(jìn)行蒸餾。當(dāng)流出液至150 ml左右時下移接收瓶，使接收管脫離液面，用純水沖洗接收管，繼續(xù)蒸餾0·5 min，結(jié)束。取下消化管，關(guān)掉蒸汽開關(guān)，凱氏定氮儀還原到待機(jī)狀態(tài)。餾出液用0·0500 mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紫色為終點，計算蛋白質(zhì)含量。同時做試劑空白實驗。

　　與粗蛋白測定儀相比，凱氏定氮儀只是較后者少了消化爐，而其測定結(jié)果能夠滿足實驗室的需求。因此，凱氏定氮儀在很多地方都得到了認(rèn)可。